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发布时间：1714448412 来源：文档文库
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细胞免疫荧光实验步骤细胞免疫荧光实验步骤 简单实验步骤如下: 1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小时. 2.-20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥 10分钟 3.PBS洗净:3min＊3 4.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS 5.PBS洗净:2＊5min 6.羊血清封闭：３７度，２０分钟
７.一抗，４度过夜，一般要大于１８小时或者３７度 １－２小时 ８.４度 PBS洗净，３min＊５次 ９.二抗 ３７度小于一小时 １０.３７度 PBS洗净，３＊５min 凉干封片（封闭液ＰＨ８.５）
活细胞免疫荧光技术－流式细胞仪标本的制备
（一）制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、 胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法 ↓
用10％FCS RPMI1640调整细胞浓度为 5×10６～１×10７／ml ↓
取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(5～50μl 的小玻璃管或塑料离心管，再加50μl 1∶20(用DPBS 稀释灭活正常兔血清
↓4℃ 30min
用洗涤液洗涤2次，每次加洗涤液2ml左右 1000rpm×5min
↓
弃上清，加入50μl工作浓度的羊抗鼠 