葡萄糖标准曲线

1 DNS

　　DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。

2 试剂制备

　　将6.3克DNS和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml，即制成3,5-二硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶中备用。

3 标准曲线

　　分别取葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中，用蒸馏水补足至1.0ml, 分别准确加入DNS试剂2ml，沸水浴加热2min，流水冷却，用水补足到15ml刻度。在540nm波长下测定吸光度。

4 样品测定

样品液适当稀释，使糖浓度为0.1-1.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度。从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。求出样品中糖含量。

pH 0.1M柠檬酸/ml 0.1M柠檬酸钠/ml pH 0.1M柠檬酸/ml 0.1M柠檬酸钠/ml
3.0 18.6 1.4 5.0 8.2 11.8
3.2 17.2 2.8 5.2 7.3 12.7
3.4 16.0 4.0 5.4 6.4 13.6
3.6 14.9 5.1 5.6 5.5 14.5
3.8 14.0 6.0 5.8 4.7 15.3
4.0 13.1 6.9 6.0 3.8 16.2
4.2 12.3 7.7 6.2 2.8 17.2
4.4 11.4 8.6 6.4 2.0 18.0
4.6 10.3 9.7 6.6 1.4 18.6
4.8 9.2 10.8   
C6H8O7·H2O分子量＝210.14 0.1M溶液含21.01g/L
Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 0.1M溶液含29.41g/L

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