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CAR-T细胞免疫治疗流程
载体包装制备流程
来源??，Plasmid&DNA制备流程
鉴定
种子库 患者外周血采集
Hek293 Lentix细胞
E.oli？菌株主库MCB
产品批号
CD19/CLL33...
工作库WCB
21FBS+DMEM 副批号1 收获100mlLB培养过夜的细菌 从患者体内的外周血中分离白细胞
Ficoll 副批号2
在6000g， 4℃,离心15min。
包装plasmid(pMD2G，pspax2 10ml Buffer P1重悬
激活 （active） or 冻存（慢冻）
洗涤Il-2、CD36hrs 目的DNA ?? （500IU/ml）
2hrs Active(速融
CaCl2 10ml Buffer
P2 ≤转导
Water 10d1ml virus+1.5ml medium+1M Cell 编码CAR的HBS 剧烈晃动离 心管4-6次使其彻底混匀， 室温放置5min。
ays
48hr 慢病毒载体
Recovery
10ml冰浴的Buffer
P3 洗涤、Il2、培养液
培养
21FBS+DMEM 同上混匀
过滤器
CAR-T cell
扩增
室温放置 10min，轻轻挤压活塞 48hrs Fab 24hrs 将溶菌产物 过滤到50ml离心管中
病毒粗液
过滤0.22μm+浓缩(沉降
加入2.5ml Buffer ER 分装冻存
冻存液（电解质&HSA），≤300Million，
补液，培养
充分混匀后 冰孵30min 1 dose：1M CAR-T/kg（50kg~50M/10%~500M）
~ 4 dose QIAGEN-tip 500柱
分析检验 表型、活力、无菌、内毒素
24hrs 病毒粗液
加入10ml Buffer
过滤QBT，重力滴下排 空 0.22μm+浓缩(沉降
加入孵育的溶菌液
产品放行 补液，培养
重力慢 慢滴下
2×30mlBuffer
QC
冻存细胞液氮运输至目的地 15ml Buffer QN洗脱DNA
病毒液
10.5ml异丙醇
洗 脱 液
?标准&检测FAB 解冻回输（速融） 输注液 稳定性
≥15000×g ，4 