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正在进行安全检测...

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基础生物学技术试验 张虎翼 131140077 B3 林静文 杨洛君 田鑫 2013-10-18
蟾蜍“双毁髓”手术技术、剑突透明软骨取材、染色、光镜下显微观察；蟾蜍泌尿系统与生殖系统的解剖实习
张虎翼 131140077 一、实验目的
1、掌握蟾蜍的握拿方法，掌握动物探针的使用。 2、掌握蟾蜍“双毁髓”手术技术。
3、两栖类动物（小动物）解剖技术。尤其掌握手术剪的使用。 4、蟾蜍剑突、透明软骨的取材、苏木精染色、光镜下观察。
5、蟾蜍体腔切开，观察泌尿系统与生殖系统，相互之间的比邻关系。 6、取出“泌尿系统与生殖系统”，于解剖盘空白处，拍照后，插入实验报告。 二、实验原理
1、蟾蜍“双毁髓”技术的生理意义：
双毁髓技术是通过破坏蟾蜍的脑髓和脊髓从而达到麻醉蟾蜍的目的的一种生物技术方法。由于蟾蜍属低等动物，因而在其在神经系统被破坏的条件下循环系统依然正常工作。这种操作可以最大限度的减轻实验给蟾蜍带来的疼痛感同时保证蟾蜍的生命体征完整，使机体更接近正常条件，且排除了神经系统对实验结果的影响，减少了蟾蜍的反射动作与疼痛感，降低了实验操作的难度的同时也将对蟾蜍的影响减到了最小，并使实验者在解剖过程中可以更清晰地观察到活体蟾蜍体内器官的形态。如果对其进行单纯的杀死，会导致蟾蜍体内器官的衰竭、肌肉的僵硬，给实验观察带来误差，不便于操作与观察。
注意，是否进行神经系统的破坏需根据具体实验决定，如需神经系统参与的实验则不能进行双毁髓，同时双毁髓只适用于低等动物，高等动物需要药物麻醉。 2、其他类型动物麻醉方法： 全身麻醉 （1）吸入法

用一块圆玻璃板和一个钟罩或一个密闭的玻璃箱作为挥发性麻醉剂的容器，多选用乙醚作麻药。麻醉时用几个棉球，将乙醚倒可其中，迅速转入钟罩或箱内，让其挥发，然后把待麻醉动物投入，约隔4-6分钟即可麻醉，麻醉后应立即取出，并准备一个蘸有乙醚的棉球小烧杯，在动物麻醚变浅时给套在鼻上使其补吸麻药。本法最适于大、小鼠的短期操作性实验的麻醉，当然也可用于较大的动物只是要求有麻醉口罩或较大的玻璃箱罢了。由于乙醚燃点很低，遇火极易燃烧，所以在使用时，一定要远离炎源。 （2）腹腔和静脉给药麻醉法
非挥发性和中药麻醉剂均可用作腹腔和静脉注射麻醉，操作简便，是实验室最常采用的方法之一。腹腔给药麻醉多用于大小鼠和豚鼠，较大的动物如兔、狗等则多用静脉给药进行麻醉。由于各麻醉剂的作用长短以及毒性的差别。所以在腹腔和静脉麻醉时，一定控制药物的浓度和注射量


基础生物学技术试验 张虎翼 131140077 B3 林静文 杨洛君 田鑫 2013-10-18
局部麻醉
（1）猫的局部麻醉一般应用0.5-1.0%盐酸普鲁卡因注射。粘膜表面麻醉宜用2%盐酸可卡因。
（2）兔在眼球手术时，可于结膜囊滴入0.02%盐酸可卡因溶液，数秒钟即可出现麻醉。
（3）狗的局部麻醉用0.5-1%盐酸普鲁卡因注射。眼鼻、咽喉表面麻醉可用2%盐酸可卡因。
3、透明软骨透明软骨的陷窝细胞，是同源细胞（有丝分裂）。 4、动物肾脏类型：
a
前肾：所有脊椎动物在胚胎期都发生前肾，但只有圆口动物以前肾作为永久性肾脏，鱼类和两栖类在幼体时期有分泌和排泄作用。
b
中肾：鱼类和两栖类的永久性肾脏，在爬行类、鸟类和哺乳类中，只有胚胎期和幼体时期有作用，到成长期就退化了。中肾发送的地位在前肾后方。 c
后肾：爬行类、鸟类和哺乳类的永久性肾脏，发生在中肾后方。后肾形状不一，随动物的种类而不同 5、 6、

三、动物与器材 实验动物：大蟾蜍
实验器材：解剖盘、大头针、骨剪、直头解剖剪、眼科剪、镊子、眼科镊、动物探针。
实验试剂：甲基蓝染料 四、方法与步骤
1、握拿蟾蜍方法：将蟾蜍后腿夹于小指与无名指之间，前腿夹于中指与无名指之间，食指按住蟾蜍头部，拇指将蟾蜍坐骨向上推。
2、用金属探针在两耳腺中点沿头背中线向后移动，直到触到一凹陷，即枕骨大孔。食指按压蟾蜍头部同时探针由凹陷处垂直插入1mm，再将探针由枕骨大孔向前平行插入颅腔并搅动，摧毁脑组织。
3、将解剖针从颅腔抽出，沿枕骨大孔刺入脊柱，破坏脊神经使得蟾蜍麻醉。 4、将蟾蜍腹部朝上置于解剖盘上，四肢伸展后大头针固定，用镊子提起腹部中央皮肤后解剖剪剪出一小口，将解剖剪伸进小口，以前三分之一刃口向前剪开至下颚处，向后剪至泄殖孔前方。
5、用眼科剪拨起剑突前段，剪下前段的剑突软骨置于玻片上，用甲基蓝染色后放在显微镜下观察软骨细胞。
6、用镊子提起腹部肌肉，解剖剪剪开，向左右分开，可以观察到仍在跳动的心脏及心脏上方的肝脏。
7、将各个器官向一侧翻开，找到黄色的脂肪体。用眼科剪，镊子将泌尿生殖系统从蛙体分离出来。
8、观察泌尿生殖系统，找到各个部位所在及形态。 9、处理掉蟾蜍，清洁器具，整理实验台，清洁手部。


本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/6f9ac629cf2f0066f5335a8102d276a2012960d8.html

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