第六节dna的变性、复性
发布时间：2023-04-14 23:12:51 来源：文档文库
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第六节DNA的变性、复性一DNA的变性(denaturationDNA分子是由两条头尾倒置的脱氧多核苷酸所组成，其中一条链的碱基与另一条的碱基之间有氢键连接，并以A－T，G－C互补，整个DNA分子呈双螺旋结构。在加热、碱性等条件下，链间氢键断裂，形成两条单链结构，这种现象称为DNA变性（denaturation）。DNA在溶液中发生变性伴随着一系列的物理化学性质的改变,如紫外吸收强度的增加,此种现象称增色效应(hyperchromicity；溶液粘度的降低；沉降速度增加等。这些物理常数常用来研究各种DNA结构和功能。对某一DNA来说，其紫外吸收强度(A260是双链DNA单链DNA。紫外吸收强度的增加与变性(解链程度成正比。若将A260的增加作为温度的函数作图，可得解链曲线(图2-18。DNA的热变性常称为DNA的“融解”（melting），解链曲线的中点所示温度称为Tm或称为融点，Tm表示使50%DNA分子解链的温度。不同种类DNA有不同的解链曲线，也有不同的Tm，Tm随G+C%含量呈线性增加(图2－19。每增加1%G+C含量，Tm增加约0.4℃，这是由于G/C碱基对之间的氢键多于A/T对之故。溶液的离子强度Tm有较大的影响，单价阳离子浓度每增加10倍，Tm增加16.6℃。某些化学试剂能显著影响Tm值，例如甲酰胺能破坏氢键，使Tm大大降低。图2-18DNA变性过程和变性曲线图2-19G+C含量对变性的
影响DNA在变性过程中，其分子量不变，但二级结构中的氢键破坏，在双螺旋解旋分离为两条链的过程中，一级结构中的共价键都不破坏。DNA变性有两个阶段，第一阶段部分解链，已解开部分不规则卷曲；第二阶段为完全解开，形成两条单链，此时若迅速泠却，每条链自身卷曲，部分区域形成链内双螺旋（见图2-20）。第一阶段变形可以逆转，即当温度降低时，已解开的链又会重新盘绕，形成完整的天然双螺旋。第二阶段DNA双链完全分开，很难恢复到天然构型。图2-20DNA热变性过程轻度变性，往往只有A-T分开，G-C不分开，富含A-T的区域就形成小“泡”，富含G-C区域保持双链结构，在电镜中可以可以观察到这种结构，从而推测 