新冠状病毒培训

发布时间：2020-10-13 16:00:33 来源：文档文库

小中大

字号：

手机查看

1、简述新冠病毒核酸检测样本采集、保存及运送要求。

答：1、标本采集要求：

（1）从事新型冠状病毒检测标本采集的技术人员应经过生物安全培训（培训合格）和具备相应的实验技能。采样人员做好个人防护。

（2）住院病例的标本由所在医院的医护人员采集。

（3）密切接触者标本由当地指定的疾控机构、医疗机构负责采集。

（4）根据实验室检测工作的需要，可结合病程多次采样。

2、标本保存要求：

用于病毒分离和核酸检测的标本应尽快进行检测，能在24 小时内检测的标本可置于4℃保存；24小时内无法检测的标本则应置于-70℃或以下保存（如无-70℃保存条件，则于-20℃冰箱暂存）。血清可在4℃存放3天，-20℃以下可长期保存。应设立专库或专柜单独保存标本。

3、标本运送要求

（1）准运证、专人专车、三层包装，清洁运送。

（2）标本采集后应尽快送往实验室，如果需要长途运输，建议采用干冰等制冷方式进行保藏。标本运送期间应避免反复冻融。

（3）院内转运：医护人员采集样本，放入一次性密封袋内密封，置于标本运送箱，交接于标本转运人员。标本由专人送入实验室。

2、简述PCR技术的基本原理、反应体系及反应条件。

答：基本原理：模拟自然DNA复制过程，通过重复高温变性、低温退火、中温延伸等简单的3个温度循环，将靶DNA扩增数百万倍。

反应体系：（1）模板DNA;（2）引物；（3）Taq DNA多聚酶；（4）脱氧三磷酸核苷（5）缓冲液。

反应条件：（1）变性温度与时间；（2）退火温度与时间；（3）延伸温度与时间；（4）循环次数

3、简述PCR实验室污染的原因及处理对策。

答：污染原因：1、标本污染2、试剂污染3、扩增产物污染

处理对策：1、对仪器彻底消毒处理2、有效通风3、更换新的试验耗材4、对加样枪进行消毒5、检查仪器性能状态，确保正常运行6、对整个实验室环境通风，必要时对整个实验室的空气进行有效氯消毒剂喷洒消毒。但要注意遮盖相关区域的仪器，避免仪器损伤。对实验室的墙壁等各死角进行消毒处理。

4、简述新冠病毒核酸实验室检测流程。

答：1、核酸提取：先进行标本预处理：将核对好的标本56℃30分钟进行灭活；在生物安全柜内室温静置20分钟，进行后续工作。加入样本→裂解吸附→磁场吸附→转移磁珠→洗涤→洗脱→移除磁珠

2、核酸扩增：（1）反应体系配置（2）核酸模版加入（3）上机检测

3、结果分析：（1）实验室确认阳性病例（2）假阴性结果原因分析

5、新冠病毒核酸检测结果如何解读。

答：（1）实验室确认阳性病例需满足以下两个条件中的一个：（1）同一份标本中新型冠状病毒2个靶标（ORF1ab、N）实时荧光RT-PCR检测结果均为阳性。如果出现单个靶标阳性的检测结果，则需要重新采样，重新检测。如果仍然为单靶标阳性，判定为阳性。（2）两种标本实时荧光RT-PCR同时出现单靶标阳性，或同种类型标本两次采样检测中均出现单个靶标阳性的检测结果，可判定为阳性。

（2）核酸检测结果阴性不能排除新型冠状病毒感染，需要排除可能产生假阴性的因素，包括：取样操作不规范，取样部位病毒含量差异，取样时机，标本的保存运输，病毒变异；检验人员是否规范操作，试剂盒和扩增仪器的性能是否达标，实验室的环境是否符合要求；实验人员对检验结果的解读是否正确。

6、简述新冠病毒核酸检测性能验证要点。

答：（1）结果的一致性,Kappa值表示。Kappa值>0.75，一致性优秀；Kappa值：0.4-0.75，一致性较好；Kappa值<0.4，一致性差。

（2）检测下限：如果是 5 次重复检测，必须 100%检出靶核酸；如果是 20 次检测，必须检出至少 18 次靶核酸。

（3）重复性：利用验证检测下限CT值数据计算批内、批间CV%，不能超过厂商声明CV。

（4）交叉反应：结果应为阴性。

7、简述试剂盒阴阳性对照与阴阳性质控的区别。

答：（1）阳性对照是由质粒/阳性标本核酸制备，目的是验证试剂是否满足质量要求；（2）阴性质控是将无菌水摆放在实验室不同位置过夜后同标本处理，目的是监测检验过程是否存在污染；监测实验室是否存在气溶胶污染。（3）阳性质控是灭活后阳性标本或标准物质同标本处理，目的是验证检验过程是否满足质量要求。

8、简述实验室生物安全策略。

答：1、软件：各种法规与规章制度、个人实验室安全素质；

2、个人防护：是一级屏障的重要方面；

3、硬件：实验室建筑结构、实验室防护装备、生物安全柜、消毒灭菌设备；