新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测(圣湘试剂)流程
一、试剂配制:
根据待测样本数量 + 2人份(空白对照和阳性对照)配制试剂:
(2019-nCoV-PCR反应液26μl/人份+2019-nCoV-PCR-酶混合液4μl/人),充分混匀成PCR混合液,每一反应管分装30μl配制好的PCR混合液。
二、核酸提取:
1、取出样本释放剂,待平衡至室温后,混匀待用;
2、取出样本后混匀 → 取200μl待测样本于1.5ml离心管中 → 3000rpm离心30s → 另取一新的小EP管中加入30μl样本释放液 → 分别加入离心后的样本上清30μl → 震荡混匀 → 静置10min → 瞬时离心(样本上清备用)
三、加样:
30μl配制好的PCR混合液 + 20μl 样本核酸(空白对照、待测样本、阳性对照)
四、PCR扩增:
50℃ 30min → 95℃ 1min →(95℃ 15s ; 60℃ 30s)x 45个循环 → 25℃ 10s
本文来源:https://www.2haoxitong.net/k/doc/46d07270a7e9856a561252d380eb6294dc882217.html
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