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发布时间：2023-11-16 14:44:51 来源：文档文库
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Ainy晴
细胞免疫荧光实验步骤
细胞免疫荧光实验步骤简单实验步骤如下:1.漂洗血清蛋白H7.2-7.437度PBS2小时.2.-20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥10分钟3.PBS洗净:3min＊34.1%Triton:30min.配成50ultriton+5mlpBS5.PBS洗净:2＊5min6.羊血清封闭：３７度，２０分钟
７.一抗，his1；400４度过夜，一般要大于１８小时或者３７度１－２小时
８.４度PBS洗净，３min＊５次
９.二抗３７度小于一小时加入5ug/mlのFITC-鬼笔环肽（100ug/ml储存液）室温染色30-60分钟
１０.３７度PBS洗净，３＊５minDAPI1：200凉干封片（封闭液ＰＨ８.５）
我の实验检测X射线照射鼻炎癌细胞后γH2AXの数量变化预实验步骤：
1）辐照结束后，弃去旧培养液，4%多聚甲醛4℃固定15分钟。2）PBS洗涤，5分钟×3次。
3）体积分数为0.2%Triton-X1004℃破膜15分钟。4）PBS洗涤，5分钟×3次。5）羊血清工作液室温封闭2小时。6）PBS洗涤，5分钟×3次。
7）0.21µg/ml一抗（梯度1:5001:7501：1000）37℃孵育细胞2小时。8）PBS洗涤，5分钟×3次。
9）2.1µg/ml二抗（1：200）37℃避光孵育细胞1小时。
Ainy晴
Ainy晴
10）PBS洗涤，5分钟×3次。
11）1µg/mlDAPI染色15分钟，使用时避光。12）PBS洗涤，5分钟×3次。
13）以及分数90%甘油封片，盖玻片细胞面朝下。14）荧光显微镜下观察。
活细胞免疫荧光技术－流式细胞仪标本の制备
（一）制备活性高の细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法↓
