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正在进行安全检测...

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免疫荧光染色大全（精华版）
组织免疫荧光法
（1）将待染组织切片置于65摄氏度恒温箱烤片1h，脱蜡
（2）1×PBS 洗涤 3 次，每次 5min。
（3）0.5%Triton X-100（PBS 配制）室温通透
10min （4）1×PBS 洗涤 3 次，每次 5min。
注意：步骤（3）和（4）用于检测细胞核抗原，细胞膜抗原直接跳过此步骤
（5）抗原修复：使用柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复，微波炉微波高火3min，后转成低火 15min。
（6）1×PBS 洗涤 3 次，每次 5min。
（7）3% H2O2，室温孵育30min，目的是灭活内源性过氧化物酶。
（8）1×PBS 洗涤 3 次，每次 5min。
（9）使用1% BSA进行室温封闭 30min，用于封闭非特异性抗原表位。
（10）按抗体推荐使用说明书孵育特异性一抗， 4°C 湿盒中静置过夜。

（11）次日取出切片，室温下复温 30min。
（12）1×PBS 洗涤 3 次，每次 5min。
（13）选取相应的免疫荧光二抗滴加于血管组织上， 37°C避光孵育30min。
（14）1×PBS洗涤 3 次，每次 5min。
（15）避光条件下，DAPI 染液染细胞核，浓度和时间根据试剂说明书使用
（16）1×PBS洗涤 3 次，每次5min。
（17）在血管组织上滴加抗荧光淬灭剂进行封片。
（18）使用荧光显微镜进行观察拍照。
贴壁细胞免疫荧光法
（1）在培养板中接种的带染色的细胞爬片用PBS泡洗3次×3min
（2）4%多聚甲醛固定细胞爬片15min （3）1×PBS洗涤 3 次，每次5min。
（4）0.5%Triton X-100（PBS配制）室温通透10min

本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/290889a1a3c7aa00b52acfc789eb172ded6399b7.html

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