细胞免疫荧光步骤
发布时间：2024-01-22 09:27:08 来源：文档文库
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细胞免疫荧光步骤
【原理】用特异性抗体（第一抗体）与细胞中的相应抗原反应，洗去未与
抗原结合的抗体再用荧光标记的第二抗体与结合在抗原上第一抗体结合，形成抗原-抗体-荧光抗体复合物由于荧光素在荧光显微镜下经过特定波长的光照摄激发后能发射出荧光，借此可对抗原定位和定量。【材料】培养细胞
【试剂】①4%的多聚甲醛。
②PBS(0.18MPH≌7.2：NaCl18克，Na2HPO4.12H2O12克，NaH2PO4,2H200.8克溶于2000m蒸馏水。
③封闭血清：与二抗同种来源属性的非免疫血清。④第一抗体：xxx。
⑤第二抗体：与一抗种属性匹配TRITC标记的，（中杉金桥公司，ZF-0313GoatAnti-MouseIgG(H+L,）。
⑥DAPI：（碧云天公司，Cat.C1006）染核。⑦抗荧光淬灭封片剂:碧云天公司Cat.PO126
【器材】冰箱，载玻片，盖玻片（做正面标记），微量移液枪，移
液枪枪头，吸管，湿盒，指甲油，DOCK笔，EP管，吸水纸，六孔板，摇床，振荡器。
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【配制液体等】①0.5%-Triton：(PBS99.5ml+0.5mlTriton由于Triton
比较粘，配前先在室温放会儿,磁力搅拌器搅匀可分装储存②10%正常封闭血清：(用PBS-Triton稀释，振荡器
上振荡充分混匀，临用前配制。
③0.3%-Tween；用PBS稀释Tween。
【步骤】
1取出生长48小时的细胞爬片，移入一个干净的六孔板冷PBS浸泡不超
过3分钟（事先在六孔板的第一排三个孔分别标记。2每个玻片滴加4%的多聚甲醛冰上固定14分钟。注意，要水平，覆盖均匀。（准备封闭血清用PBS-Triton稀释1:10振荡器上振荡混匀）。3冷PBS,5分钟X2次
